文献信息

北京大学肿瘤医院暨北京市肿瘤防治研究所，核医学科，国家药监局放射性药物研究与评价重点实验室，恶性肿瘤发病机制及转化研究教育部重点实验室等团队的研究成果“非定点方法构建的靶向CLDN18.2探针⁶⁸GaNOTA-376的体内外性质评价”在学术期刊《肿瘤影像学》上发表。平生公司的小动物PET/CT（型号：Super Nova）产品在论文中提供了重要的肿瘤小鼠PET/CT图像和定量分析。

该研究的通讯作者为北肿杨志主任，朱华研究员。第一作者为刘畅。

文献背景

[摘要]目的：以非定点标记的方法构建⁶⁸Ga标记的靶向CLDN18.2的正电子发射体层成像（positron emission tomography，PET）探针⁶⁸Ga-NOTA-376，并评价其体内外性质。方法：以p-SCN-Bn-NOTA为螯合剂，非定点偶联靶向CLDN18.2的纳米抗体376，得到前体NOTA-376，对偶联后的前体进行⁶⁸Ga放射性标记。通过放射性薄层色谱法（Radio thin layer chromatography，Raio-TLC）测定探针的标记率、放射化学纯度及体外稳定性，并进行探针在人胃腺癌小鼠模型的micro-PET/计算机体层成像（computed tomography，CT）显像实验。结果：⁶⁸Ga-NOTA-376显示出高标记率（89.98±0.07）%、高放射化学纯度（97.67±0.02）%以及较高的比活度（16.69±6.60）GBq/μmol，并且在5%人血清白蛋白（human serum albumin，HSA）和磷酸盐缓冲溶液（phosphate buffered saline，PBS）中保持稳定。Micro-PET/CT结果表明探针在CLDN18.2阳性肿瘤中的最大标准摄取值（maximum standard uptake value，SUVmax）显著高于CLDN18.2阴性肿瘤，4.0 h时CLDN18.2阳性肿瘤及CLDN18.2阴性肿瘤的SUVmax分别为9.08±0.33及1.92±0.32。结论：本研究以非定点标记的方法成功构建了靶向CLDN18.2探针⁶⁸Ga-NOTA-376，标记率高，具有良好的稳定性及靶向性，是一种有潜力的PET探针，可用于CLDN18.2蛋白表达水平的检测。

实验方法

⁶⁸Ga-NOTA-376的Micro-PET/CT显像

AGS CLDN18.2 /AGS模型裸鼠尾静脉注射5.55 MBq ⁶⁸Ga-NOTA-376，在注射后0.5、1.0、2.0、4.0 h，使用异氟烷气体麻醉荷瘤小鼠，进行静态PET扫描。经过平生医疗科技有限公司的Avatar3重建后获得Micro-PET/CT融合图像，勾画各个器官的感兴趣区（region of interest，ROI）计算最大标准摄取值（maximum standard uptake value，SUVmax）。

实验结果

模型鼠Micro-PET/CT显像

对右侧腋窝处携带AGS/AGS^CLDN18.2肿瘤的BABLC/c裸鼠注射⁶⁸Ga-NOTA-376后的0.5、1.0、2.0、4.0 h进行Micro-PET/CT显像。

图像显示肾脏在⁶⁸Ga-NOTA-376注射后的各个时间点具有很强的放射性，0.5、1.0、2.0、4.0 h各个时间点AGS模型鼠肾脏的SUVmax分别为12.69±0.29、12.33±0.07、47.22±0.99、49.48 ± 0.16，AGS^CLDN18.2模型鼠肾脏的SUV max分别为12.92±0.77、14.10±0.05、54.44±0.33、55.51±0.33（图4），表明⁶⁸GaNOTA-376经过泌尿系统代谢。⁶⁸Ga-NOTA-376在AGS^CLDN18.2肿瘤部位快速积聚，0.5 h已可见肿瘤显像，SUVmax为2.02±0.19，2.0 h可观察到肿瘤高对比度成像，SUVmax为8.63±0.09，并随时间延长摄取逐渐升高，4.0 h时SUVmax为9.08±0.33（图4）。

在注射 ⁶⁸Ga-NOTA-376 后的各个时间 点 AGS^CLDN18.2模型鼠肿瘤（ T ）与肌肉 （ M ） 的 SUV max之比均显著高于 AGS模型鼠（ P ＜ 0.05 ， 图 5 ），并在注射后2.0 h达到最大值55.70±6.81。

文献结论

CLDN18.2高表达的AGS细胞系及野生型的AGS细胞系小鼠移植瘤模型Micro-PET/CT结果显示，⁶⁸Ga-NOTA-376在小鼠细胞及肿瘤中的摄取与CLDN18.2的表达高度相关，AGS^CLDN18.2模型鼠的摄取值明显高于AGS模型鼠的摄取值。本课题组此前研究中的免疫组织化学的结果显示，AGS^CLDN18.2肿瘤中CLDN18.2高且均匀表达，而AGS肿瘤中CLDN18.2表达呈阴性。

综上所述，本文建立了标记率高、放射化学纯度高、稳定性可靠且靶向性好的CLDN18.2靶向的纳米抗体放射性探针的⁶⁸Ga非定点标记方法，显示出进一步应用于临床进行靶向治疗患者筛选及治疗效果评估的潜力。

使用设备

                                                 Super Nova^® Micro PET/CT（III 代外观图）