文献信息
宁波大学附属李惠利医院等单位的研究成果“A microballoon structured hydrogel with enhanced mechanical strength and electrical conductivity for meniscus tissue engineering(一种用于半月板组织工程、兼具力学强度与导电性的微泡结构水凝胶)在《Materials Today Advances》杂志(IF=8.0)上发表。平生公司的离体CT(VENUS)在论文中提供泡增强型导电水凝胶的图像和定量分析。
该研究的通讯作者为任国强和郝明明教授。第一作者为王晓博医师。
文献摘要
耐疲劳水凝胶是理想的半月板替代材料,可维持膝关节生物力学稳定性、减轻软骨磨损。本文制备了一种微泡增强型导电水凝胶(PHC2),命名取自三种核心组分首字母:聚乙烯醇(PVA)、透明质酸钠(HA)与 Ⅰ 型胶原(Collagen I);材料通过协同冷冻诱导相分离结合气泡模板法制备而成。该制备工艺可构筑独特的微泡多孔网络结构(孔径 50–150 μm),孔壁致密厚实,显著提升材料弹性与抗疲劳性能。PHC2 具备优异力学性能:抗压强度 6.8±0.5 MPa,弹性模量 0.5±0.1 MPa;同时交流阻抗较低(1 kHz 下阻抗 15 Ω),具备稳定电信号传导能力。体外生物相容性实验与体内动物实验证实,该材料能够有效缓解软骨退变、抑制炎症反应,拥有良好的生物力学适配性与组织整合能力。综上,PHC2 是一种具有应用前景的电活性半月板替代材料,具备临床转化潜力。
实验方法
Micro-CT分析
将样品置于液氮快速冷冻,随后在真空环境(真空度<50 Pa)、-50 ℃条件下冷冻干燥 48 h,以获得稳定的干态结构。将干燥后的水凝胶断面固定于样品台,溅射镀一层 20 nm 厚金膜以提升样品导电性能。
植入水凝胶显微 CT 成像检测
采用平生医疗科技有限公司的 VENUS VNC-102 型显微 CT 设备对植入体内的水凝胶进行扫描,评价植入材料整体及内部结构。扫描参数设置如下:电压 50 kV,电流 200 μA,体素分辨率 9 μm,全部操作严格遵循标准化显微 CT 检测规范。使用集成于 Cruiser 工作站的 Avatar 三维重建算法对原始图像数据重建,生成高分辨率体数据。重建所得三维模型可清晰呈现半月板植入区域的空间结构,便于对材料形貌、孔隙分布及组织整合情况开展精细化分析。
实验结果
如图 2A 所示,采用传统方法制备的 PHC1 水凝胶微观结构致密紧实,仅存在少量稀疏、形态不规则的孔洞。高倍扫描电镜(SEM)观测进一步证实其无多级结构,整体呈近乎无孔的形貌特征。对 PHC1 开展 Micro-CT 表征(图 2B)可见其为实体块状结构,孔道连通性极差:俯视图整体密度均一,截面图中孔洞彼此孤立、形态杂乱,无法形成相互贯通的网状通路。该结构虽能提供一定的力学支撑,但会严重阻碍细胞浸润、营养与代谢废物交换以及滑液渗透,因此无法模拟半月板替代材料所需的载荷分散与能量耗散功能 。与之形成鲜明对比,PHC2 水凝胶(图 2C)构建了微球增强型多级结构,内部微孔分布均匀,孔径介于 50–150 μm 之间。SEM 图像显示其孔壁分层致密,由连续高分子网络相互连接,赋予材料稳定的骨架结构与更优异的力学性能。PHC2 的 Micro-CT 三维重建结果(图 2D)证实,材料内部形成高度互通的多孔网络,孔径均一、结构连续性良好。
图 2 PHC1 与 PHC2 水凝胶的扫描电镜形貌及显微 CT 三维重建图像(A、C)分别为 PHC1、PHC2 的扫描电镜图,左右分图为不同放大倍数下的观察结果;(B、D)分别为 PHC1、PHC2 的显微 CT 三维重建图,左图为俯视图,右图为断面图。
为评价两种材料修复半月板缺损的应用潜力,本研究构建兔内侧半月板切除模型,并将两种材料分别植入对应缺损区域。术后 8 周对膝关节行显微 CT 扫描,定量评估关节间隙狭窄程度,以此作为半月板及软骨退变的评价指标。移植术后 8 周,每组收取兔膝关节标本,进行显微 CT 扫描并三维重建。扫描图像可见:模型组与 PHC1 组胫骨内侧平台均出现大量骨赘,提示膝关节内侧间室机械应力增高,进而诱发骨组织增生(图 6A)。于冠状位测量内侧关节间隙宽度并进行统计学分析,结果显示:两种材料治疗组关节间隙宽度均显著高于模型组;其中 PHC2 组修复效果优于 PHC1 组,差异有统计学意义(p<0.05)(图 6B、C)。上述结果表明,PHC2 可在膝关节内起到良好缓冲效果,减轻软骨磨损。
图 6 膝关节影像学评估(A)基于显微 CT 扫描的膝关节三维重建图像;(B)显微 CT 图像中关节间隙宽度定量测量;(C)关节间隙宽度测量数据统计学对比。数据以均值 ± 标准差表示。
实验结论
本研究成功构建了一种新型耐疲劳导电水凝胶(PHC2),该材料由聚乙烯醇(PVA)、I 型胶原蛋白与透明质酸复合而成,具备微球增强多级孔结构。制备流程结合高速搅拌、单向梯度冷冻与多次冻融循环工艺;PHC2 可仿生天然软骨多孔微观结构,相比对照组水凝胶 PHC1,在力学性能、电化学响应性与细胞相容性上均显著提升。力学测试表明,PHC2 抗压强度可达 6.8 MPa,历经 1200 次循环载荷后仍可维持结构完整,同时具备低阻抗特性,兼具优异机械稳定性与电活性。体内实验证实,该水凝胶可与宿主组织稳定整合,有效填充半月板缺损、缓解关节软骨退变,并抑制促炎因子表达。综上,PHC2 是极具潜力的半月板组织工程生物材料,有望推动关节损伤修复再生治疗策略的临床转化。
使用设备
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Micro CT(型号:VENUS)(平生医疗科技)
影像软件:Avatar(平生医疗科技)